液相色譜法在生物堿分析中的應用

         生物堿是植物中一類重要化學成分，許多生物堿或含生物堿的提取物已廣泛用于醫藥領域，因此對不同來源的、存在于較復雜體系或基質中的生物堿進行快速、靈敏、可靠的定性和定量分析一直是受人矚目的研究課題。 

1、生物堿液相色譜的分析模式  
        根據液相色譜分析生物堿時所使用固定相性質、流動相組成及極性不同，其分析模式大致可分為：正相吸附色譜法、正相硅膠反相洗脫系統色譜法、反相色譜法及離子交換色譜法。 
        正相吸附色譜法：通常以硅膠基質為吸附固定相，流動相為不同極性的有機溶劑或不同比例混合溶劑，分離過程主要依靠生物堿與吸附劑吸附作用的差異實現，為了改善分離，提高溶洗脫能力，常于流動相中加濃氨液、二乙胺、三乙胺等。該法應用于生物堿分析的文獻較少。  
        正相硅膠一反相洗脫系統色譜法（NS-RE）：通常采用未經化學改性的普通硅膠為固定相，以極性有機溶劑（甲醇、乙腈）和高pH緩沖溶液為流動相，分析包括生物堿在內的堿性藥物。該法柱效高，峰形對稱，是簡便有效的方法。在實際應用中，流動相的組成是主要的影響因素，流動相中除含有調節pH 的緩沖鹽外，有時還要三乙胺、溴化四丁基銨等競爭離子或烷基磺酸鈉等對離子。因此，影響保留與分離的主要因素是流動相pH、競爭離子種類及濃度 。  
        反相液相色譜法（RP-液相色譜）：近年來RP-液相色譜應用于生物堿分析方面的文獻很多，已成為常規的方法。但普通存在拖尾峰（tailing peak）。前者少見。>色譜峰的展寬拖尾，導致分離效能低，這主要緣于生物堿結構中堿性氮原子與固定相未鍵臺酸性硅醇基的相互作用。即使是所測生物堿在較低濃度下，仍常產生峰漂移及峰對稱性差等現象。針對此缺陷，研究工作者從適用于堿性物質分析的反相填料的設計選擇，流動相中緩沖鹽的使用，流動相添加劑（離子對試劑、有機胺改性劑）等幾方面進行了較為廣泛細致的研究，并取得了一定的進展。 
        離子交換色譜法：該法以陽離子交換樹脂為固定相，利用質子化的生物堿陽離子與離子交換劑交換能力的差異而達到分離生物堿的目的，有關生物堿液相離子交換色譜法的應用報道較少。 

2、生物堿液相色譜分析檢測方法  
        目前，生物堿液相色譜分析檢測方式多以紫外法為主，在定性分析方面，紫外法檢測選擇性低，定性專屬性差。隨著二極管陣列檢測器使用的普及，顯著提高了液相分析檢測的選擇性。此外，根據生物堿的理化性質，其它檢測方式如熒光法、電化學法、蒸發光散射法亦得到了應用。近年來，液相色譜-質譜聯用技術已應用于生物堿分析，增強了對生物堿的定性檢測能力，提高了檢測靈敏度。新的接口技術及離子化方法的發展．使得HPLC-MS在生物堿的分析中得到較廣泛的應用，近年的文獻報道日漸增多。 

3、生物堿液相色譜分析的樣品處理方法 
        因生物堿常具有一定的堿性，一般常用堿化液液萃取或酸水提取等方法從中草藥、中成藥及生物樣品等較復雜體系中提取純化，以達到富集和去除雜質的目的。近年來，固相萃取（SPE）技術及超臨界流體萃取等現代提取純化技術亦應用于樣品的提取純化。